Индикация возбудителей пироплазмоза животных

Разработчики: ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии г. Новочеркасск

Ключников А.Г., Карташов С.Н., Миронова Л.П., Миронова А.А., Калабеков И.М., Карташова Е.В., Левченко Н.В.

Цель: показана впервые в отечественной ветеринарной практике эффективность применения ПЦР в диагностике пироплазмоза сельскохозяйственных и домашних животных.

Описание: Обнаружение бабезий в крови проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), в которой используются праймеры на область генома, консервативную для всех представителей данного рода. По наличию в реакционной смеси специфического фрагмента ДНК делают заключение о присутствии в исследуемом материале возбудителя пироплазмоза. В основе метода лежит амплификация специфического участка за счет многократного повторения циклов денатурации ДНК в исследуемой пробе, отжига специфических олигонуклеотидных затравок (праймеров) и зонда, меченного флуоресцентным красителем и синтеза цепей ДНК с помощью фермента Таq- полимеразы.

Преимущества в сравнении с аналогами: предлагаемый нами метод обеспечивает выявление ДНК возбудителя в исследуемом материале. Метод отличается высокой специфичностью и чувствительностью, технической простотой. В связи с этим метод применим для рутинных диагностических исследований.

Место внедрения: лаборатория ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии по изучению функциональной диагностики болезней с.-х. животных.

Возможные потребители: животноводческие хозяйства различных форм собственности.

Экономические и практические показатели внедрения: результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла «Сt» в соответствующей графе в таблице результатов). Результат считается достоверным только в случае прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и отрицательного контроля выделения ДНК. Образец считают положительным на наличие ДНК бабезий, если значение Сt на канале FАМ менее 28. Образец считают отрицательным, если по каналу FАМ для него значение Сt отсутствует.

Источник: Каталог научно-практических рекомендаций и инновационных разработок ученых ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, г. Новочеркасск - 2011 .